ЭТИКА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

I. Обязательным условием проведения физиологических экспериментов является соблюдение правил гуманного обращения с животными. В 1984 г. были утверждены Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных. В документе Европейского совета по научным медицинским исследованиям и Консультативного комитета ВОЗ по медицинским научным исследованиям указываются важнейшие принципы постановки медико-биологического эксперимента.

II. Там, где необходимо, в этих целях (охрана здоровья людей) следует применять математические модели, машинное моделирование и биологические системы "in vitro".

III. Эксперименты на животных следует проводить только после тщательного рассмотрения их значения для здоровья человека или самих животных, для прогресса биологических знаний.

IV. Для экспериментов следует отбирать здоровых животных надлежащего вида, ограничиваясь тем минимальным их количеством, которое требуется для получения научно достоверных результатов.

V. Исследователям и другому персоналу всегда надлежит относиться к животным как к существам, чувствительным к различного рода воздействиям, и считать своим этическим долгом обращаться с животными и использовать их таким образом, чтобы свести к минимуму причиняемые им неудобства и боль.

В России порядок использования животных в эксперименте определяется целым рядом документов, утвержденных руководителями всех ведомств, в которых могут проводиться такого рода опыты. Основным документом являются «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных». В этом документе оговорено, что исследователь имеет право использовать животных в эксперименте, однако при этом должен неукоснительно соблюдаться ряд положений:

1) проводить эксперимент с использованием животных можно только в государственных учреждениях, имеющих соответствующую экспериментальную базу;

2) постановка такого рода экспериментов допускается только в тех учреждениях, где есть оборудованный виварий, укомплектованный штатом сотрудников, обслуживающих животных;

3) проводить эксперименты с животными должны лица, имеющие высшее образование по биологическим, медицинским, ветеринарным и зоотехническим специальностям;

4) модель эксперимента должна отвечать требованиям гуманного обращения с животными, и в случае проведения любых болезненных манипуляций необходимо применение наркоза;

5) выполнение требований гуманного обращения с животными должно быть отмечено при изложении методики и результатов эксперимента в научных публикациях или составлении отчетов.

При содержании животных в виварии следует учитывать, что помещение любого животного в новые для него условия является стрессогенным воздействием, которое обязательно отражается на результатах биологических экспериментов. Стрессогенными факторами являются новые запахи, близость человека, ограниченная подвижность, скученность, температурные воздействия, изменения рациона и режима питания и т. д. Для смягчения степени воздействия этих факторов необходимо содержать животных каждого вида в условиях, максимально приближенных к условиям его обитания в природе.

Основные объекты исследования в условиях малого практикума по физиологии и патофизиологии – травяные лягушки Rana temporaria и лабораторные крысы.

Лягушек следует содержать в наклонных сосудах (аквариумы, банки) с дном, частично залитым водой. Желательно, чтобы каждому животному хватало пространства на полу. Если нельзя обеспечить постоянного слабого потока воды через сосуд, то необходимо сменять воду в нем 3 раза в неделю. Обычно лягушек содержат при температуре 10–18 ºС, но зимой температуру воды следует снижать до 3–5 °С, а уровень воды повысить так, чтобы вода закрывала животных.

Лабораторных крыс содержат в пластмассовых кюветах с дном, покрытым опилками. Количество крыс в одной кювете определяется размерами этой кюветы и возрастом животных. В экспериментах обычно используются крысы массой 150–220 г. В стандартных кюветах (550×300×200 мм) допустимо содержать 8–10 животных. Лучше всего кормить крыс стандартными гранулированными кормами (около 20 г в сутки на одно животное), добавляя время от времени какие-либо сочные корма. Нужно внимательно следить за тем, чтобы крысы получали воду – около 30 г в сутки на одно животное, используя для поения бутылки со стеклянными или металлическими носиками.

Когда для эксперимента, используют несколько особей, приходится применять маркировку животных. Она должна быстро наноситься, не травмировать животных, быть заметной и в то же время легко смываться. Наиболее удобный способ маркировки – окраска небольшого участка тела животного пикриновой кислотой (желтый цвет), фукорцином (красный цвет), бриллиантовым зеленым. Следует помнить, что пикриновая кислота токсична и для экспериментатора, и для животного. Если животное будет слизывать пятно, нанесенное концентрированным раствором пикриновой кислоты, то оно может погибнуть. Татуировку и надрезание ушей в качестве маркировки мы не рекомендуем из-за болезненности процедуры.

Способы введения препаратов животным определяются задачей эксперимента и описаны в соответствующих разделах пособия, а также в Приложении 2.

Все манипуляции с животными, которые могут вызывать у них боль, должны проводиться при достаточной местной или общей анестезии. Методы обезболивания описаны при изложении хода выполнения задач.

В случае необходимости умерщвления (эвтаназии) животного в ходе эксперимента или после его окончания необходимо руководствоваться правилами эвтаназии, не допуская мучений животного (см. Приложение 3).

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Правила проведения работ с использованием

экспериментальных животных

1.1. Настоящие Правила распространяются на все учреждения, организации и предприятия системы здравоохранения и регламентируют все виды использования экспериментальных животных в медико-биологической практике: для научного эксперимента, в целях обеспечения учебного процесса, биологического тестирования, в ходе изготовления вирусных и других препаратов.

1.2. Правила имеют целью:

- повышение качества научных и других видов работ с животными;

- обеспечение принципов гуманного обращения с животными;

- упорядочение системы планирования и отчетности в области организации экспериментальной работы и совершенствовании лабораторного животноводства.

2.1. Право на использование животных имеют научно-исследовательские, лечебные и учебные учреждения, санэпидстанции и учреждения по производству бактерийных, вирусных и других препаратов.

2.2. Учреждения могут проводить работу с животными в том случае, если они имеют:

а) виварий (экспериментально-биологическую клинику), оборудованный согласно Санитарным правилам от 06.04.73 № 1045-73;

б) экспериментальную лабораторию, оборудованную согласно требованиям (Приложение 1);

в) штат сотрудников, обеспечивающий уход за животными и выполняющий требования гуманного обращения с ними (Приложение 2).

3.1. К работе с экспериментальными животными допускаются лица, имеющие высшее медицинское, ветеринарное, зоотехническое, фармацевтическое или биологическое образование, разрешение на право использования животных и несущие ответственность за соблюдение правил.

3.2. Лица, имеющие среднее медицинское, ветеринарное, или зоотехническое образование (а в учебных учреждениях и студенты) и знакомые с настоящими Правилами, допускаются к проведению несложных и неболезненных процедур на животных без получения персонального разрешения, но под контролем ответственного лица и под его ответственность, за исключением персонала предприятий по производству бактерийных и вирусных препаратов.

3.3. За подготовку экспериментатора к работе с животными и за соблюдение Правил использования животных в целом несет ответственность руководитель кафедры (отдела, лаборатории, кабинета), в которых работает лицо, допущенное к эксперименту на животных.

4.1. Комиссия по экспериментальной работе при Ученом медицинском совете Минздрава контролирует соблюдение норм гуманного обращения с животными, условий содержания и проведения работы с ними.

4.2. Учреждения системы здравоохранения обязаны представлять при посещении их членами Комиссии либо при запросе сведения о проделанной работе с использованием животных, экспериментальной базе и штатном обеспечении и соблюдении сотрудниками положений настоящих Правил.

При обнаружении нарушений требований гуманного обращения с животными и других основных положений настоящих Правил Комиссия по экспериментальной работе имеет право внести в работу лаборатории соответствующие коррективы.

4.3. Контроль за использованием животных на местах проводят комиссии, создаваемые в министерствах здравоохранения республик.

4.4. При представлении в печать данных о результатах исследований, выполненных с использованием экспериментальных животных, учреждения и отдельные лица обязаны указывать сведения об использовании животных (вид, количество, тип применявшегося обезболивания и так далее).

5.1. Все процедуры на животном, которые могут вызвать у него боль или иного рода мучительное состояние, проводятся при достаточном обезболивании (под местной анестезией или наркозом), кроме случаев использования животных для получения биологических препаратов, их контроля в иммунологических исследованиях (Приложение 2). Опыты с применением миорелаксантов, которые не являются обезболивающими средствами, во всех случаях проводятся при полном обезболивании.

5.2. Запрещается использование животного для болезненных процедур более чем один раз, кроме животных, используемых для контроля биологических препаратов в их производстве, животных-доноров и при изучении схем иммунизации.

При необходимости повторных опытов такого рода вопрос должен обсуждаться на ученом совете института, и проведение эксперимента санкционировано решением Комиссии по экспериментальной работе.

5.3. При проведении экспериментов и других процедур в условиях повышенного риска нанесения животному болезненных раздражений (травма в затруднительных условиях наблюдения за клинической картиной состояния животного, обездвижение животного, выполнение процедур на животных малоопытными лицами, например студентами) строго обязательно присутствие лица, ответственного за использование животного, и контроль с его стороны за сохранением адекватного обезболивания.

5.4. В послеоперационном периоде животное должно получать квалифицированный уход и адекватное обезболивание.

5.5. Животное, которое осталось после эксперимента или другой процедуры искалеченным или нежизнеспособным, должно быть своевременно умерщвлено с соблюдением всех требований гуманности.

5.6. Эвтаназия, т. е. гуманное умерщвление животного, производится ответственным лицом или под его непосредственным наблюдением при соблюдении всех требований гуманности, в соответствии с требованиями (см. Приложение 3).

5.7. Уборка трупа животного может производиться только после того, как смерть будет констатирована лицом, ответственным за работу с животным.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

к Правилам проведения работ с использованием

экспериментальных животных

ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ПРОЦЕДУР

НА ЖИВОТНЫХ

I. Подготовка животного к эксперименту

1. В период введения в эксперимент животное должно адаптироваться к обстановке лаборатории и привыкнуть к экспериментатору.

2. При доставке в лабораторию крупных животных запрещается применение силовых или болезненных приемов. В случае агрессивных или истеричных животных можно сделать предварительную премедикацию с помощью безыгольных инъекторов с удлиненной насадкой.

3. Мелких животных (грызунов и пр.) следует брать осторожно, применять корнцанги только с резиновыми насадками, не сжимать животных сильно руками, что причиняет животным травмы и боль. Запрещается оставлять животных в ожидании эксперимента больше, чем это необходимо для проведения премедикации.

4. Запрещается переносить мелких животных по холоду в неутепленных клетках.

II. Премедикация. Фиксация животного

1. Премедикация проводится ответственным за работу с животным лицом или под его наблюдением.

2. Если животное испугано или состояние наркоза наступает не сразу, экспериментатор должен ждать, пока животное не успокоится или не заснет.

3. Животное можно фиксировать только после того, как подействует наркоз.

4. При проведении процедур, которые требуют иммобилизации бодрствующих животных, разрешается привязывать животное к лабораторной доске только на непродолжительное время. Для иммобилизации животного на продолжительное время следует применять ящики-домики и щитки-ошейники.

5. После фиксации собак с них снимаются повязки-намордники.

6. Повязки на конечностях животного должны быть мягкими, не препятствовать кровообращению; животному не должна быть придана неудобная поза с вывернутыми конечностями.

7. При помещении бодрствующих животных в стереотаксический аппарат необходимо провести местное обезболивание участков головы, подвергающихся сдавливанию.

III. Обезболивание

1. После дачи животному наркоза, необходим постоянный контроль со стороны экспериментатора (или анестезиолога) за уровнем наркоза. При использовании миорелаксантов рекомендуется систематическое выведение животного из состояния обездвижения для проверки уровня наркоза. При первых признаках ослабления наркоза он должен быть углублен. Запрещается применение средств, препятствующих контролю за уровнем наркоза: афонии, завязывания морды и т. д.

2. Все эксперименты с нанесением животному болезненных ощущений, включая эксперименты по изучению шока, должны проводиться с отключением сознания у животного. Допускается нанесение пороговой боли при изучении механизма боли и влияния на организм анальгетиков и анестетиков.

Порог боли определяется индивидуально для каждого животного; критерием возникновения порогового болевого ощущения следует считать реакцию избегания: отдергивание конечности, перемену места, прыжок. Нанесение болевых раздражений, вызывающих голосовую и активную двигательную (оборонительную) реакцию, запрещается. Пороговые болевые раздражения наносятся в условиях свободного поведения животного.

Наносимая пороговая боль должна быть непродолжительной. Развитие стрессовых состояний у животных в результате болевых раздражений и других мучительных состояний недопустимо.

3. При биологическом тестировании и производстве медико-биологических препаратов все процедуры проводятся в условиях щажения животного; болезненные процедуры при маркировке животных (отрезание ногтевых фаланг и др.), при взятии крови, при воздействии на слизистую глаза и так далее должны проводиться под местной анестезией или другого рода обезболиванием.

4. Дозы и время введения препаратов должны фиксироваться в соответствующих документах (протокол эксперимента).

IV. Уход за животными в послеоперационном периоде

1. При доставке животного в клетку после операции должны использовать удобные носилки, исключающие нанесение животному травм, сдвигания повязок. В случае применения миорелаксантов и искусственного дыхания животное должно оставаться в лаборатории до полного восстановления дыхания.

Грызуны, получившие травмы, например при взятии крови из хвоста, отсаживаются в отдельную клетку во избежание покусов.

2. Животное в хроническом опыте должно быть помещено в удобную клетку, облегчающую также условия наблюдения и ухода за животным. С момента появления у животного болей оно должно получать седативные и обезболивающие препараты. Животное должно получать квалифицированный уход под контролем экспериментатора.

3. После особо сложных и ответственных операций рекомендуется первые сутки устанавливать круглосуточное дежурство около животного.

4. Состояние животного и назначение препаратов должны отмечаться в протоколе эксперимента.

ПРИЛОЖЕНИЕ 3

к Правилам проведения работ с использованием

экспериментальных животных

Порядок проведения эвтаназии

(умерщвления) животного

1. Гуманным умерщвлением животного – эвтаназией – называется быстрое и безболезненное умерщвление животного, не сопровождающееся у него чувством тревоги и страха.

2. Животное должно получать адекватный уход (анестетики, питание, поение и т. д.) вплоть до самого момента его умерщвления.

3. Умерщвление животных не должно производиться в помещении, где содержатся животные, запрещается умерщвлять одних животных на глазах у других.

4. В острых опытах животное должно умерщвляться до прекращения действия наркоза. Во всех случаях животное должно умерщвляться своевременно – до наступления у него болезненных состояний.

5. Оптимальным и универсальным методом умерщвления животных является передозировка наркоза – введение анестетика в летальной дозе (дозировка для наркоза).

6. При соблюдении этих условий допустимо умерщвление животного другими методами:

а) мелких животных: мышей, крыс, лягушек, птиц и т. д. – путем декапитации;

б) кроликов – путем воздушной эмболии;

в) крупных животных: собак, свиней и пр. – с помощью пропускания электрического тока, при этом электроды вводятся в область продолговатого мозга и в область крестца.

7. При необходимости изучения ультраструктуры мозга применяются мгновенные методы эвтаназии (мгновенное замораживание при погружении животного в жидкий азот).

Использование в этом случае электротока недопустимо. Если предусматривается морфологический анализ тканей мозга с использованием светового микроскопа, то для эвтаназии должны применяться анестетики.

8. Допускается умерщвление животных, используемых в производственных целях, путем обескровливания. При этом может быть подобран метод обезболивания, отличный от фармакологических воздействий.

9. При проведении эксперимента с применением миорелаксантов допускается умерщвление животного путем отключения искусственного дыхания, но лишь в условиях сохранения адекватного наркоза.

10. Допускается умерщвление мелких животных с помощью наркоза (ингаляционного) без предварительного введения других видов анестетиков. Наиболее пригодным для этой цели является хлороформ. Но при этом эвтаназия должна производиться в специальной камере, в теплом помещении; подача хлороформа должна вестись очень небольшими дозами.