Работа 5. Определение содержания гемоглобина

В крови здоровых людей содержание гемоглобина составляет 13–14,5 г % (130–145 г/л). Идеальным количеством считается 160,7 г/л гемоглобина. У мужчин содержание гемоглобина выше, чем у женщин. Гемоглобин состоит из белка глобина и простетической группы гема, который имеет в своем составе атом двухвалентного железа, способный присоединять и отдавать кислород. Соединение гемоглобина с кислородом называют оксигемоглобином – НbО₂. Это соединение определяет ярко-алый цвет артериальной крови. После отдачи кислорода оксигемоглобин превращается в дезоксигемоглобин, который присутствует в венозной крови, имеющей более темный цвет, чем артериальная кровь. Гемоглобин синтезируется эритробластами и нормобластами костного мозга. При разрушении эритроцитов гемоглобин после отщепления гема превращается в желчный пигмент билирубин, который поступает в кишечник и выводится с калом и мочой.

Цель работы – определить содержание гемоглобина в крови человека.

Для работы необходимы: скарификатор; спирт; пипетка на 20 мкл; трансформирующий раствор; фотоэлектроколориметр (ФЭК).

Ход работы. Исследуемую кровь разводят в 251 раз трансформирующим раствором (20 мкл крови + 5 мл трансформирующего раствора), содержащим ацетонциангидрин, калий железосинеродистый и натрий двууглекислый. Через 10 минут измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса гемоглобинцианида на фотоэлектроколориметре при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете толщиной 10 мм против контрольной пробы с трансформирующим раствором. Расчет содержания гемоглобина (С г/л) производят и по формуле:

,

где Е_пробы – оптическая плотность опытной пробы, Е_{калибр.} – оптическая плотность калибратора, 120 г/л – концентрация гемоглобина в калибраторе.

Результаты работы и их оформление. Занесите в рабочую тетрадь результаты определения гемоглобина, сделайте соответствующие выводы.