Работа 2. Взятие крови у животных

Цель работы – овладеть навыками взятия крови у представителей разных классов позвоночных.

Для работы необходимы: шприц с инъекционными иглами; пастеровские пипетки; часовое стекло; 5%-ный раствор натрия цитрата или 0,2%-ный раствор гепарина (1 000 ед/мл); анестетики; спирт; марля; вата.

Объекты исследования – рыба, лягушка, кролик.

Задача 1. Взятие крови у рыбы

Ход работы. Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5–10 минут после отлова. В зависимости от размера объекта и необходимого количества крови забирают кровь несколькими способами: из сердца, жаберной вены, хвостовой артерии, отсечением хвоста.

Место пункции после снятия чешуи обрабатывают 70⁰ спиртом и высушивают ватным тампоном для удаления слизи. Для взятия крови чаще используют шприц с инъекционной иглой либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитратом натрия или гепарином (см. Приложение 1). Место взятия крови нельзя сжимать во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Повторно брать кровь из одного и того же места не рекомендуется. Анализируемая кровь должна быть свежей, жидкой. Во избежание разрушения эритроцитов (гемолиза) кровь переносят в подготовленные пробирки (или часовое стекло), сливая осторожно по стенке.

Для проведения большинства биохимических анализов используется венозная, артериальная или капиллярная кровь. В некоторых случаях, когда определяются глюкоза, молочная кислота, пируват, используют венозную кровь.

При рутинных исследованиях можно использовать как сыворотку, так и плазму крови. Сыворотка крови – это дефибринизированная плазма крови. Для получения сыворотки кровь берут без антикоагулянта. При этом кровь для свертывания оставляют на несколько часов при комнатной температуре либо до следующего дня в холодильнике. Иногда для лучшей ретракции тромба кровь ставят на один час в термостат при температуре 37 ⁰С. Образовавшийся тромб отделяют стеклянной палочкой от стенки пробирки, а затем осаждают при 3 000 об/мин в течение 10 мин.

Гемолизированную сыворотку или плазму крови не рекомендуется использовать для анализа.

Обычно сыворотку и плазму крови хранят в холодильнике при 0–4 ⁰С. В случае, если не имеется данных об устойчивости соединения в сыворотке и плазме при хранении, рекомендуется проводить анализ сразу после взятия крови.

Задача 2. Взятие крови у лягушки

Ход работы. Лягушку обездвиживают разрушением спинного и головного мозга и фиксируют ее булавками на препаровальной восковой пластинке брюшной стороной вверх. Захватывают пинцетом мечевидный отросток грудины и, приподняв его, средними ножницами разрезают вокруг него мышцы и кости плечевого пояса, после чего грудину удаляют. Снимают перикард с сердца, захватывают верхушку желудка сердца серфином и вытягивают его из грудной полости. На желудке сердца производится разрез, из которого забирается кровь.

Задача 3. Взятие крови у кролика

Ход работы. Для получения небольшого количества крови у кролика делают прокол или разрез ушных вен. Наиболее удобна для этой цели вена, расположенная по тонкому краю уха. Зажав пальцами или зажимом центральный конец вены, прокалывают или слегка надрезают сосуд с помощью иглы Франка или скальпеля (при этом следует избегать перерезки всего сосуда). Выступившую кровь забирают обычным способом. Кровь в больших количествах следует брать из яремной вены на шее. Вену не очень туго перевязывают жгутом ближе к центральному концу, тогда она отчетливо набухает. Вводят в просвет вены достаточно широкую иглу от шприца (иглу надо вводить в краниальном направлении, под острым углом к поверхности кожи). Вытекающую из иглы кровь переносят на часовое стекло или в пробирку.