Работа 12. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Устойчивость эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам называют осмотической резистентностью. В гипотонических растворах происходит разрыв оболочки эритроцитов и гемоглобин выходит наружу. Явление разрушения эритроцитов с выходом гемоглобина в плазму крови называется гемолизом.

Задача 1. Наблюдение явлений гемолиза

Цель работы – определить концентрации хлорида натрия, при которых гемолиз происходит наиболее интенсивно.

Для работы необходимы: мерные пипетки; штативы для пробирок (5 штук); раствор хлорида натрия (1 %); дистиллированная вода; дефибринированная кровь.

Ход работы. Для определения осмотической устойчивости эритроцитов следует приготовить два ряда пробирок (по 5 штук) с раствором хлорида натрия убывающей концентрации.

№ пробирок	Количество воды (в 1 мл)	Количество 1 % раствора NaC1 (в мл)	Концентрация (в %)
1	1	9	0, 9
2	3	7	0, 7
3	5	5	0, 5
4	7	3	0, 3
5	9	1	0, 1

В каждую пробирку прибавляют по 0,5 мл дефибринированной крови. Содержимое всех пробирок тщательно перемешивают и оставляют на 40–50 мин в штативе. По истечении этого времени отмечают, какие изменения произошли в каждой пробирке. О частичном гемолизе судят по легкому окрашиванию жидкости гемоглобином после осаждения эритроцитов (при встряхивании пробирки раствор оказывается мутным). При полном гемолизе раствор прозрачен, имеет характерный лаковый блеск.

Результаты работы и их оформление. Описать результаты, отметить, в какой пробирке наблюдается частичный, а в какой – полный гемолиз. При каких концентрациях хлористого натрия наблюдается частичный и полный гемолиз?

Задача 2. Определение осмотической резистентности эритроцитов методом Яновского

Цель работы: определить осмотическую устойчивость эритроцитов путем их подсчета под микроскопом при действии различных концентраций хлорида натрия.

Для работы необходимы: спирт; вата; скарификатор; смеситель для определения эритроцитов; фильтровальная бумага; микроскоп; камера Горяева; хлорид натрия (0,05; 0,4; 0,46 %).

Ход работы. Исследуемую кровь набирают в 4 капилляра-смесителя и разводят в 200 раз: в 3 капиллярах указанными выше растворами, а в четвертом – 3 % раствором хлористого натрия. Далее ведут подсчет количества эритроцитов в камере Горяева (см. работу 2). Из результатов подсчетов выводят проценты устойчивых эритроцитов по отношению к общему количеству в 1 мм³, для чего производят подсчет количества эритроцитов в 3 % растворе соли.

Результаты работы и их оформление. Занесите в таблицу данные подсчета эритроцитов при разбавлении крови различными концентрациями хлористого натрия, установите концентрации, при которых обнаружено наименьшее и наибольшее число эритроцитов, сделайте соответствующие выводы.