6.5. Определение антиокислительной активности сыворотки крови по Глевинду

Принцип метода. Для определения антирадикальной активности используют раствор устойчивого свободного радикала – 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила, который восстанавливается в реакции с антиоксидантом, при этом оптическая плотность его раствора, измеряемая при длине волны 517 нм, резко снижается.

Реактивы и их приготовление.

1. Толуол для спектроскопии.

2. 10 % раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты.

3. Раствор 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила в метаноле с оптической плотностью 0,7–0,73.

4. Аскорбиновая кислота, раствор 0,1 мкэкв в 1 мл.

Ход определения. Для определения содержания антиоксидантов в сыворотке крови белки осаждают фосфорно-вольфрамовой кислотой. Для этого к 0,25 мл сыворотки добавляют 0,25 мл раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты. Объем фильтрата доводят до 1,5 мл бидистиллированной водой и добавляют 3 мл раствора 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила в метаноле. Пробы хорошо перемешивают, через 5 мин добавляют 4 мл толуола и встряхивают. Для разделения фаз смесь центрифугируют при 1000 об./мин в течение 10 мин. Оптическую плотность верхнего окрашенного слоя измеряют при длине волны 517 нм против толуола. Контрольная проба содержит 1,5 мл воды. Для расчета используют разницу оптических плотностей контрольной и опытных проб. Количество антиоксидантов определяют по калибровочной кривой, для построения которой используют раствор аскорбиновой кислоты.

Результаты выражают в мкМ.

Литература

Glavind J. Antioxidants in animal tissue // Acta Chem. Scand. – 1963 – Vol. 17, № 13. – P. 1635–1640.