Лабораторная работа №5

Колориметрический метод определения общих липидов

в сыворотке и плазме крови

Принцип метода. Продукты распада ненасыщенных липидов образуют с реактивом, состоящим из серной и фосфорной кислот и ванилина, соединение, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации общих липидов в пробе.

Исследуемый материал. Сыворотка или плазма. Общие липиды в пробе стабильны 23 часа при комнатной температуре (15-25°С) или 3 дня при 2-8°С.

Состав набора.

1. Реагент 1 (фосфованилин, 235 ммоль/л).

2. Стандарт (общие липиды, хлороформенный раствор триолеина, 7,5 г/л).

3. Дополнительный реагент (серная кислота) не входит в набор.

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность. Реагент и стандарт готовы к использованию.

Ход анализа

К 0,1 мл сыворотки крови, стандартного раствора липидов или дистиллированной воды прибавьте 2,5 мл серной кислоты как указано в табл. 4.

Таблица 4

Состав проб	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Проба, мл	0,1	–	–
Стандарт, мл	–	0,1	–
Вода, мл	–	–	0,1
Серная кислота, мл	2,5	2,5	2,5

Пробы тщательно перемешайте и поместите в кипящую водяную баню на 10 мин. После этого пробы охладите водопроводной водой. Из каждой пробы отберите 0,2 мл смеси и перенесите в другие пробирки, содержащие 3 мл Реагента 1 (фосфованилин) как указано в табл. 5.

Таблица 5

Состав пробы

Опытная проба

Калибровочная проба

Контрольная

проба

Надосадочная жидкость, мл

0,2

0,2 мл

Реагент 1, мл

3,0 мл

После тщательного перемешивания пробы оставьте на 45 мин в темноте при комнатной температуре или инкубируйте при 37°С в течение 15 мин. Оптическую плотность пробы и стандарта измерьте при 520 (490-550) нм против контрольной пробы в кювете на 0,5 см. Окраска стабильна до 1 часа.

Расчет. Концентрацию общих липидов в плазме или сыворотке (С, г/л) рассчитайте по формуле:

где С – концентрация общих липидов в г/л, Е пробы – оптическая плотность опытной пробы, Е стандарта – оптическая плотность стандартной пробы, 7,5 – концентрация общих липидов в стандарте.

Нормальные значения. Концентрация общих липидов в сыворотке и в плазме крови составляет 4,5-8,0 г/л.

ЗАДАНИЕ

1. Определите содержание общих липидов в сыворотке (плазме) крови.

2. Сделайте вывод.