Лабораторная работа №4

Количественное определение альбумина в сыворотке крови

колориметрическим методом на основе реакции с бромкрезоловым зеленым

Принцип метода. При взаимодействии альбумина в слабокислой среде с бромкрезоловым зеленым (рис. 2) образуется окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 628 нм.

Рис. 2. Структурная формула бромкрезолового зеленого.

Использование липемичных и гемолизированных образцов недопустимо.

Состав реагентов.

1. Монореагент, рН 4,2: Цитрат натрия – 100 ммоль/л, бромкрезоловый зеленый – 100 мкмоль/л.

2. Калибратор – раствор альбумина с концентрацией 60 г/л.

Реактивы готовы к использованию.

Сбор и подготовка проб. В качестве проб можно использовать сыворотку или плазму с ЭДТА. Не используйте гепарин в качестве антикоагулянта. Не рекомендуется использовать цельную кровь и гемолизат. Лучше всего использовать свежую сыворотку. Если пробы содержат осадок, отцентрифугируйте их перед началом анализа.

Ход определения

Подготовьте пробы согласно схеме (табл. 3).

Таблица 3

Состав пробы	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Монореагент, мл	4,0	4,0	4,0
Сыворотка, мл	0,02	–	–
Калибратор, мл	–	0,02	–
Вода, мл	–	–	0,02

Пробы тщательно перемешайте и инкубируйте в течение 5 мин при температуре 18-25°С. По окончании инкубации измерьте оптическую плотность пробы (E пробы) и калибратора (Е калибратора) против контроля на реактивы при длине волны 628 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Окраска стабильна в течение 3 часов после окончания инкубации при хранении проб в защищённом от света месте при комнатной температуре.

Расчет. Концентрацию альбумина в сыворотке или плазме (С, г/л) рассчитайте по формуле:

где Е пробы – оптическая плотность опытной пробы в единицах оптической плотности; Е калибратора – оптическая плотность калибровочной пробы; 60 – концентрация альбумина в калибраторе, г/л.

Если концентрация альбумина превышает 60 г/л, разведите образец в 2 раза физиологическим раствором, повторите исследование и результат умножьте на 2.

Нормальные значения: содержание альбумина в сыворотке или плазме крови человека составляет 35-50 г/л.

ЗАДАНИЕ

1. Определите содержание альбумина в сыворотке и плазме крови.

2. Сделайте вывод.