Лабораторная работа №2

 

Определение содержания общего белка в сыворотке (плазме)

крови биуретовым методом

 

Принцип метода. Метод основан на способности белков, содержащих пептидные связи, образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в пробе.

Исследуемый материал. Сыворотка или плазма крови без выраженного гемолиза и липемии.

Состав набора.

1. Реагент № 1. Биуретовый реактив, концентрат: натрия гидроокись – 0,5 М, калий-натрий виннокислый – 80 мМ, калий йодистый – 75 мМ, медь сернокислая – 30 мМ (200 мл).

2. Калибратор – раствор сывороточного альбумина – 70 г/л, натрия хлорид – 154 мМ (2 мл).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность. Реагент № 1. Реагент стабилен при комнатной температуре в течение 12 месяцев при хранении в темноте. Перед проведением анализа необходимое количество реагента № 1 разведите бидистиллированной водой в соотношении 1:4 (рабочий реагент).

Калибратор готов к использованию, стабилен в течение года при комнатной температуре. После вскрытия флакона стабилен не менее 6 месяцев. Тщательно закрывайте флаконы сразу после каждого использования реагентов.

 

Ход анализа

 

Подготовьте пробы согласно схеме (табл. 1):

Таблица 1

 

Подготовка пробы следующего состава

Опытная

проба

Калибровочная проба

Контрольная проба

Рабочий реагент, мл

5

5

5

Сыворотка (плазма) крови, мл

0,1

–

–

Калибратор, мл

–

0,1

–

Вода дистиллированная, мл

–

–

0,1

 

Пробы тщательно перемешайте и инкубируйте при комнатной температуре 30 мин или 15 мин при 37°С. Фотометрируйте опытную и калибровочную пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Окраска стабильна в течение часа.

Расчет концентрации (С) общего белка в исследуемом материале проведите по формуле:

 

,

 

где С – концентрация белка в г/л; Е пробы – оптическая плотность опытной пробы, Е калибратора – оптическая плотность калибровочной пробы, 70 г/л – концентрация белка в калибраторе.

Нормальные значения: 65-85 г/л.

 

ЗАДАНИЕ

 

1. Определите содержание белка в сыворотке и плазме крови.

2. Сделайте вывод.