Лабораторная работа №17
Определение содержания кальция в
плазме (сыворотке)
крови колориметрическим методом
Принцип
метода. Кальций в слабокислой среде
образует окрашенный комплекс с Арсеназо III. Интенсивность окраски при длине
волны 650 нм (630-670) нм пропорциональна концентрации кальция в пробе. Влияние
магния маскируется гидроксихинолинсульфоновой кислотой.
Исследуемый
материал (образец). Свежая сыворотка или плазма крови (без
ЭДТА).
Состав
набора.
1. Реагент № 1 – Монореагент
фосфатный буфер, рН 7.5 – 50 ммоль/л; арсеназо III – 200 ммоль/л,
гидроксихинолинсульфоновая кислота – 5 ммоль/л.
2. Калибратор. Кальций – 2,27
ммоль/л (9,1 мг/100 мл).
Приготовление
рабочего реагента. Все реагенты готовы к использованию.
Ход
работы
Для определения концентрации натрия
подготовьте пробы в соответствии с табл. 18.
Таблица 18
|
Состав проб |
Опытная проба |
Калибровочная проба |
Контрольная проба |
|
Образец, мл |
0,1 |
– |
– |
|
Бидистиллированная (деионизированная) вода |
– |
– |
0,1 |
|
Реагент 1, мл |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
|
Реагент 2, мл |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
|
Калибратор, мл |
– |
0,1 |
– |
Пробы тщательно перемешайте и
инкубируйте в течение 5 мин при комнатной температуре (+18-25°С) или 37°С.
После окончания инкубации измерьте оптическую плотность опытной и калибровочной
проб против контрольной (холостой) при длине волны 570 (540-590) нм в кювете с
длиной оптического пути 1,0 см.
Окраска растворов стабильна в
течение 1 ч после окончания инкубации.
Расчет
концентрации кальция произведите по формуле:
,
где С – концентрация кальция в
плазме в ммоль/л; Е пробы –
оптическая плотность опытной пробы; Е
калибратора – оптическая плотность калибровочной пробы; 205 ммоль/л –
концентрация кальция в калибраторе.
Примечания.
1. Основным источником ошибок
является загрязнение посуды, кювет. Рекомендуется использование одноразовой
пластиковой посуды.
2. Стеклянную посуду необходимо
мыть бидистиллированной или деионизированной водой.
Нормальные
значения концентрации кальция в сыворотке и в плазме
крови составляет 2,02-2,60 ммоль/л.
ЗАДАНИЕ
1. Определите содержание натрия в
сыворотке (плазме) крови.
2. Сделайте вывод.
|
|
|
|
|
|
|
|