Лабораторная работа №16
Количественное определение
содержания натрия в
сыворотке (плазме) крови
колориметрическим методом
Принцип
метода. Натрий связывается ионами осаждающего реагента с
образованием нерастворимого комплекса. Оставшиеся в растворе ионы осаждающего
реагента образуют окрашенное соединение с тиогликолятом. Интенсивность окраски
реакционной среды обратно пропорциональна содержанию натрия в исследуемом
материале и определяется фотометрически при длине волны 405 (400-410) нм.
Исследуемый
материал. Свежая гепаринизированная плазма или сыворотка крови
без следов гемолиза.
Состав
набора.
1.
Реагент 1 (осаждающий реагент).
2. Реагент 2 (тиогликолят аммония).
3. Калибратор (калибровочный
раствор натрия хлорида с концентрацией 150 ммоль/л).
Подготовка
реагентов к процедуре анализа и их стабильность. Вскрытые
флаконы с реагентами стабильны в течение 3-х месяцев при условии достаточной
герметизации флаконов и хранении в защищённом от света месте при комнатной
температуре (+18-25°С).
Тщательно закрывайте флаконы с
реагентами после каждого использования!
Ход анализа
Для осаждения натрия подготовьте
пробы в соответствии с табл. 16.
Таблица 16
|
Состав проб |
Опытная проба |
Калибровочная проба |
Контрольная проба |
|
Реагент 1, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
Сыворотка (плазма)
крови, мл |
0,02 |
– |
– |
|
Калибратор, мл |
– |
0,02 |
– |
|
Вода
бидистиллированная, мл |
– |
– |
0,02 |
Пробы тщательно перемешайте и
инкубируйте 5 мин при комнатной температуре (+18-25°С); затем снова перемешайте
в течение 30 секунд и выдержите 30 мин в защищённом от света месте.
Осадите центрифугированием все
пробы при 900 g в течение 10 мин. Для дальнейшего анализа используйте
прозрачную надосадочную жидкость (супернатант).
Для определения концентрации натрия
подготовьте пробы в соответствии с табл. 17.
Таблица 17
|
Состав проб |
Опытная проба |
Калибровочная проба |
Контрольная проба |
|
Реагент 2, мл |
4,0 |
4,0 |
4,0 |
|
Супернатант опытной
пробы, мл |
0,04 |
– |
– |
|
Супернатант
калибровочной пробы, мл |
– |
0,04 |
– |
|
Супернатант
контрольной пробы, мл |
– |
– |
0,04 |
Реакционную смесь тщательно
перемешайте и инкубируйте в течение 5 мин при комнатной температуре (+18-25°С).
После окончания инкубации измерьте оптическую плотность опытной, калибровочной
и контрольной (холостой) проб против воды при длине волны 405 нм в кювете с
длиной оптического пути 1,0 см.
Окраска растворов стабильна в
течение 25 мин после окончания инкубации при хранении проб в защищённом от
света месте при комнатной температуре (+18-25°С).
Расчет
концентрации натрия произведите по формуле:
,
где С – концентрация натрия в
плазме (сыворотке) крови в моль/л; Еконтр. – оптическая плотность
контрольной пробы; Епробы – оптическая плотность опытной пробы; Екалибр.
– оптическая плотность калибровочной пробы; 150 ммоль/л – концентрация натрия в
калибраторе.
Нормальные
значения концентрации натрия в сыворотке крови и в
плазме крови 135-150 ммоль/л.
ЗАДАНИЕ
1. Определите содержание натрия в
сыворотке (плазме) крови.
2. Сделайте вывод.
|
|
|
|
|
|
|
|