Лабораторная работа №12

Количественное определение содержания креатинина в сыворотке крови

Принцип метода. Креатинин при взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде образует окрашенные соединения (реакция Яффе – образование таутомера пикрата креатинина), интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации креатинина в сыворотке крови.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Реактивы: калибратор, стандартный раствор креатинина (177 мкмоль/л), 2%-ный раствор пикриновой кислоты, 10%-ный раствор NaOH, 5%-ный раствор ТХУ, дистиллированная вода.

Ход работы

В трех пробирках смешайте реактивы по схеме (табл. 11):

Таблица 11

Состав проб	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Сыворотка, мл	0,5	–	–
Дистиллированная вода, мл	–	–	1,5
ТХУ, мл	0,5	0,5	0,5
Стандартный раствор, мл	–	0,5	–

Через 5 мин опытную пробу и стандартную пробы центрифугируйте при 3000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость используйте для подготовки следующих проб (табл. 12):

Таблица 12

Состав проб	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Надосадочная жидкость, мл	1,0	1,0	1,0
Пикриновая кислота, мл	0,5	0,5	0,5
NaOH, мл	0,5	0,5	0,5

Перемешайте и через 20 мин колориметрируйте опытную и калибровочную пробы при зеленом светофильтре (540 нм) в кювете толщиной 0,5 см против контроля.

Расчет концентрации (С) креатинина в исследуемом образце проведите по формуле:

,

где С – концентрация креатинина в сыворотке крови в мкмоль/л; 177 – концентрация креатинина в калибраторе, А_оп – оптическая плотность опытной пробы; А_ст – оптическая плотность калибровочной пробы.

Норма креатинина в сыворотке крови – 53-106 мкмоль/л.