Лабораторная работа №10
Определение содержания мочевины в
сыворотке крови
Принцип
метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом, в
присутствии тиосемикарбазида и трехвалентного железа, окрашенные соединения, интенсивность
окраски которых пропорциональна концентрации мочевины в пробе.
Исследуемый
материал. Сыворотка крови.
Состав
набора.
1. Реагент № 1. Раствор
диацетилмонооксима –
2. Реагент № 2. Раствор серной
кислоты –
3. Реагент № 3. Раствор
тиосемикарбазида гидрохлорида –
4. Реагент № 4. Железо хлорное –
5. Калибратор – раствор мочевины –
8,33 ммоль/л (5 мл).
Подготовка
реагентов к процедуре анализа и их стабильность. Рабочий
реагент. Смешайте реагенты в следующей последовательности: №1 – 10 мл, №2 – 10
мл, №3 – 2 мл и №4 – 0,4 мл; немедленно добавьте 58 мл воды и перемешайте.
Рабочий реагент стабилен в течение рабочего дня.
Ход анализа
Компоненты реакционной смеси
внесите в пробирки вместимостью 10 мл в количествах, указанных в табл. 8.
Таблица 8
|
Состав проб |
Опытная проба |
Калибровочная проба |
Контрольная проба |
|
Рабочий реагент, мл |
2,00 |
2,00 |
2,00 |
|
Исследуемая проба, мл |
0,01 |
– |
– |
|
Калибратор, мл |
– |
0,01 |
– |
|
Вода дистиллированная,
мл |
– |
– |
0,01 |
Пробы тщательно перемешайте,
закройте пробирки колпачками из алюминиевой фольги или стеклянными каплями и
инкубируйте точно 10 мин на кипящей водяной бане. После окончания инкубации
пробы охладите под проточной водой, и измерьте оптическую плотность опытной и
калибровочной проб против контрольной пробы при длине волны 510 (490-540) нм в
кювете с толщиной поглощающего свет слоя 5 мм. Окраска стабильна 15 мин после
окончания инкубации.
Расчет
концентрации мочевины в исследуемом образце
проведите по формуле:
,
где С – концентрация мочевины в
опытной пробе, ммоль/л; Е пробы –
оптическая плотность опытной пробы; Е
калибратора – оптическая плотность калибровочной пробы; 8,33 – концентрация
мочевины в калибровочном растворе, ммоль/л.
Нормальные
показатели: 2,5-8,3 ммоль/л.
ЗАДАНИЕ
1. Определите содержание мочевины в
сыворотке крови человека и крысы.
2. Сделайте вывод.
|
|
|
|
|
|
|
|