4.4. Определение содержания ТБК-активных продуктов в эритроцитах крови

Реактивы.

1. Раствор ТХУ, 170 г/л.

2. Раствор ТБК, 8 г/л.

3. Раствор хлорида натрия, изотонический, 0,15 моль/л (9 г/л).

Ход определения. Для исследования отбирают 0,1 мл эритроцитов, трижды отмытых охлажденным изотоническим раствором, и гемолизируют внесением в пробирку 2 мл дистиллированной воды. К полученному гемолизату добавляют 1 мл раствора ТХУ и 1 мл раствора ТБК. Пробу прогревают в кипящей водяной бане в течение 10 мин, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об./мин.

Интенсивность окраски измеряют при длине волны 540 нм (желательно на спектрофотометре) в кювете с толщиной слоя 1 см против контрольной пробы (вместо эритроцитов вносится 0,1 мл физ. раствора и проводится через все вышеперечисленные процедуры). Для проведения расчётов используют формулу:

С (мкмоль/л) = ,

где Е_оп – оптическая плотность опытной пробы; 4 мл – объем водной фазы; 0,1 мл – объём эритроцитарной массы; 10⁶ – коэффициент перевода «моль/л» в «мкмоль/л»; 1,56·10⁵ – коэффициент молярной экстинкции.

Литература

Андреева Л.И., Кожемякина А.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбиталовой кислотой // Лаб. дело. – 1988. – № 11. – С. 41–43.