4.2. Определение первичных продуктов перекисного окисления липидов в мозге

Принцип метода (см. методику определения первичных продуктов ПОЛ в крови).

Отбор проб и их хранение. Из мозга готовят 10 %-ный гомогенат на 0,067 М фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 1 мМ ЭДТА, и сразу же используют в опыте.

Оборудование. Гомогенизатор с тефлоновым пестиком, низкоскоростная центрифуга, качалка, спектрофотометр.

Реактивы и их приготовление.

1. 0,067 М фосфатный буфер (рН 7,4).

2. 0,067 М фосфатный буфер (рН 7,4), содержащий 1 мМ ЭДТА. В мерной колбе емкостью 100 мл растворяют в 0,067 М фосфатном буфере 87,2 мг ЭДТА, и доводят объем до метки.

3. Остальные реактивы те же, что и для определения продуктов ПОЛ в крови.

Ход определения. К 9 мл смеси гептан-изопропанол (1:1 по объему) добавляют 1 мл 10 %-ного гомогената мозга. Экстракцию липидов производят в течение 15 мин путем встряхивания на качалке. Пробы центрифугируют при 5000 об./мин в течение 10 мин. Липидные экстракты сливают в сухие пробирки с притертой пробкой. Дальнейший ход анализа аналогичен процедуре для крови.

В качестве контроля служат пробы, в которые вместо гомогената вносят 1 мл 0,067 М фосфатного буфера 0,067 М (рН 7,4), содержащего 1 мМ ЭДТА.

Расчет содержания продуктов ПОЛ проводят, относя величины соответствующих экстинкций с 1 мг ткани по формуле:

,

где Е – оптическая плотность пробы относительно контроля; V – объем соответствующего липидного экстракта; С – содержание ткани в пробе, мг.

Литература

Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г., Лившиц Р.И. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах крови // Вопр. мед. химии. – 1989. – Т. 35. – № 1. – С. 127–131.