3.3.2. Определение активности ксантиноксидазы в плазме крови

 

Можно определять активность ксантиноксидазы в плазме крови по уровню образовавшейся в результате реакции мочевой кислоты.

Реактивы и их приготовление. Реакционная смесь: 100 мкл (50 мкМ) ксантина, 100 мкл (500 мкМ) НАД+ или буфер без НАД+, 600 мкл (0,0024 М) К-фосфатного буфера, 0,15 М NaCl, рН 7,35. Реакционная смесь содержит также ингибитор уриказы (2,4-гидрокси-6-карбокси-1,3,5-триазин) в конечной концентрации 3 мкМ.

Ход определения. К указанному объему реакционной смеси добавляют 100 мкл плазмы крови. Инкубация в течение 30 мин при температуре 37 °С. Уровень образовавшейся мочевой кислоты определяют спектрофотометрически при λ = 293 нм.

Для расчета строят калибровочную кривую по мочевой кислоте или используют коэффициент молярной экстинкции 7,59·103 М–1см–1.

Результаты выражают в нмоль мочевой кислоты на мл плазмы в мин.

 

Литература

1. Медицинские лабораторные технологии / под ред. Л.И. Карпищенко. – СПб.: Интермедика, 1999. – Т. 2. – С. 33–34.

2. Waud W.R., Rajagopalan К.V. Purification and properties of the NAD+-dependent (type D) and О2 dependent (type O) forms of rat liver xantine dehydrogenase // Arch. Biochem. Biophys. – 1976. – Vol. 172.P. 354–364.