Лабораторная работа №20

Определение концентрации гемоглобина в крови

унифицированным колориметрическим методом

Принцип метода. Под действием феррицианида калия гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), который в присутствии ацетонциангидрина трансформируется в окрашенный комплекс цианометгемиглобин (гемиглобинцианид), интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации гемоглобина в крови и определяется фотометрически при длине волны 540 (520-560) нм.

Исследуемый материал. Свежая капиллярная кровь. Внимание, кровь берется из пальца специалистом, имеющим право на эту процедуру, с использованием стерильных скарификаторов и с соблюдением мер предосторожности.

Состав набора.

1. Монореагент, концентрат (20 мл).

2. Калибратор (калибровочный раствор гемоглобина с концентрацией 120 г/л).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность. Рабочий реагент: перед проведением анализа смешайте необходимое количество монореагента с дистиллированной водой в соотношении 1:9. Рабочий реагент можно хранить в темном месте в плотно закрытом флаконе при комнатной температуре (+18-25°С) не более 2 месяцев. Монореагент после вскрытия флаконов стабилен в течение всего срока годности при хранении при комнатной температуре (+18-25°С). Калибратор после вскрытия флакона стабилен не менее 3-х месяцев при условии достаточной герметизации флакона и хранении в защищенном от света месте при +2-8°С. Не замораживать.

Ход работы

Для определения концентрации гемоглобина подготовьте пробы в соответствии с табл. 20.

Таблица 20

Состав проб	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Рабочий реагент, мл	5,00	5,00	5,00
Кровь, мл	0,02	–	–
Калибратор, мл	–	0,02	–
Вода дистиллированная, мл	–	–	0,02

Объемы исследуемого образца можно изменить, соблюдая соотношение 1:250.

После забора крови оботрите пипетку, кровь внесите в пробирку, содержащую рабочий реагент, и несколько раз промойте пипетку в этом растворе. Содержимое пробирок тщательно перемешайте. Через 3-5 мин измерьте оптическую плотность опытных и калибровочной проб против рабочего реагента в кювете с длиной оптического пути 1 см при длине волны 540 (520-560) нм. Окраска стабильна в течение 6-ти часов в защищенном от света месте.

Расчет. Концентрацию гемоглобина в исследуемом образце (С, г/л) рассчитайте по формуле:

,

где Е пробы – оптическая плотность опытной пробы, Е калибратора – оптическая плотность калибровочной пробы, 120 – концентрация гемоглобина в калибраторе, г/л.

Нормальные значения: мужчины: 132-164 г/л; женщины: 115-145 г/л.

ЗАДАНИЕ

1. Определите содержание гемоглобина в собственной крови.

2. Проведите сравнительный анализ содержания гемоглобина в крови у студентов в группе и сделайте вывод.